通过分子动力学模拟鉴定了GH18家族几丁质酶的热敏感Loop（loop2和loop4）。不同几丁质酶中的loop的构象差异较大，特别是loop4，超嗜热酶比嗜热酶的loop4长10个氨基酸以上，形成了更强的相互作用能。表现出超强的稳定性。Loop2与loop4虽然都是热敏感loop，但是二者功能有显著差异，理性设计的策略也不同。loop2可与底物结合，loop4不直接与底物结合而是稳定其N末端的催化残基。通过功能分析对其进行定向改造，通过增强loop2与底物的相互作用能以及稳定loop边缘而提高其活性和稳定性。通过增强loop4参与形成的疏水簇而稳定loop4及催化残基，提高了热稳定性3.5倍。值得注意的是，该突变保证了酶的稳定性和活性的权衡，使得稳定性增强的同时，酶活也有所提高。

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.5c04696